※ 引述《odones (天空)》之铭言： : 最近要抽植物的Genomic DNA : 可是一直不顺跑电永都是smear的情况 : 把protocol列出来希望有大大可以给予指教 : 谢谢 : 1. CTAB 500贡ul ＋ beta-me 40 ul 预热65℃ 30 min : 2. 液态氮研磨植物叶片加入（1）水浴65℃ 2 hr : 3. 加入chloroform/isoamyl 24：1 500汹ul，倒转tube 100次，离心8000 rpm 10min : 4. 吸取上清液到新tube，加入chloroform/isoamyl 24：1 500 ul，倒转tube 100次，离心8000 rpm 10min，共三次 : 5. 加入isopropanol 500ul，放至-20℃ overnight : 6. 离心8000 rpm 10min，4℃，去上清液晾乾 : 7. 加入TE buffer 500ul 弹至全溶（tip可切斜口） : 8. 加入RNase 5汹ul，37℃ 30min : 9. 加入isopropanol 500 ul，放至-20℃ 30min : 10. 离心8000 rpm 10min去除上清液 : 11. 70％酒精wash 2次，晾乾 : 12. 加入TE buffer 200 ul，测OD，跑电泳 1.你在把研磨好的植物材料放到CTAB时,可能潮解到 (我初期做实验时有发生过) 2.会不会你的植物材料的次级代谢物太多,遮光不足等 (像我的材料会额外加入PVPP) 3.水浴的时间....我是不清楚你是看paper还是前人留下来的方法...我是觉得煮太久了 4.我建议你再第7步骤後再细纯化一次利用phenol与chloroform... 因为我觉得你这个纯化方法算是粗纯化而已...在最後的DNA中仍存在许多杂质~如蛋白质 5.（tip可切斜口）<-----这个步骤很危险...原本灭菌好的tip..可能切的动作污染! 6.你可以将RNase作用时间再延长至1个小时...让他充分作用 7.我想最终还是你的TE buffer是不是已经污染等等~ 其实再第一次TE buffer溶完时,就可以先跑一次电泳... 如果这时候已经smear就知道之前步骤出出问题了 -- ▃◣ ◢ ◣ 吼～ ◢ ◣ ◢ ◣◣ ◣ ◥ ▉≡ ◥▆◢ ▄ ▄ ▃▄▂ --

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