作者shuyanc (荷包大失血~~~)
看板Biotech
标题Re: [问题] 抽plasmid 失败好几次了
时间Sun Jul 15 14:57:10 2007
※ 引述《anneying (12)》之铭言：
: 最近抽plasmid 测出来的260/280都好高
: 最高到2.3 而且plasmid的浓度都是之前的好几倍
: 想说是不是菌养太多了，使的RNAse 作用不够力 才会让ratio过高
: 想请问大家起初在挑colony 的时候 ，都是先在LB agar上面养多久阿?
: 挑多大的colony呢?
: 我用的是GIAGEN MAXI 之前抽出来都可以用，最近已经失败好几次
: 所上8月底要review，抽不到plasmid根本不能做实验
: 请大家帮忙我了 拜托!! 谢谢!
不论是 DNA 或 RNA 都是看 260 的吸收啊！(280 是看 protein)
所以 260/280 ratio 高和有没有 RNA 污染应该没有太大的关系吧！
有没有 RNA 污染，其实跑个 agarose gel 就很清楚了
如果有，会在约很低分子量的地方 (如50bp) 有 smear 糊糊的东西
不过 Qiagen 的 kit，应该不会有这种问题才对。
至於 transfection efficiency 变差的原因也很多
我做过 260/280 只有 1.6的，也是可以做哩 (呵呵 ^.^||)
我除了用 260 测浓度 (OD值 * 50 * 稀释倍数)
也会再跑个胶和 marker 比较看看
transfection reagent 好像都要和 DNA 做一定比例的混合
太少或太多都做不出来喔！
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