※ 引述《elderbear (暧昧不好不要暧昧)》之铭言： : 想请教一下 重复之间有差异(假设三重复的曲线不完全重叠) : 大家会把这样的差异归纳在哪里? (取样问题? pipeting error?? PCR 效率???) : 还有什麽其他我忽略的可能吗? 还是就是机差?? 通常是一定要全叠在一起 (我都做2平行的重复，reagent太贵了) 我都是把两管(算2.1管)的量"均匀且不起泡"混在一起在分装到两个PCR tube里 这样做绝对超准！！ : ※ 引述《Highwind (小羊回来了)》之铭言： : : 才做三重复喔 : : 六重复再来看吧,PCR的差异很大喔 : 我自己在做也是做三重复... : specialist 是跟我说当两条线很接近而有一条较偏离...可以考虑omit它 (经验法则) : 但是老师跟我说作三重复的的理由就是要用三重复去平均机差使得机差降低 : 所以...我目前也只能全部都不舍弃的去分析 = = : : 简单的定量就拿该gene稀释10x,100x.1000x与Ct做检量线 : : 条件抓的好通常还满直的 : : 这样就能比较出与control的倍数差异 : : housekeeping gene也做相同的事,务求precision提高 : : 如果同一批连housekeeping gene都差异很大就不用做了,从头练技术 : : 题外话 : : 你看到结果没差个5-6倍,最後还用统计硬凹的paper请怀疑他 : 我不太懂基因表现量的分析是怎麽分析的? : 不过我是在作基因改造含量的分析 : 对两个目标片段拉两个检量线 : 然後把同个样品的两个基因的量相除得到基因改造含量的比 : 可是不是算出来多少就是多少吗? : (举例来讲,放0.1%样品可能做出0.08~0.12% 放0.5%样品可能作出 0.46~0.56%) : 不太懂什麽叫做"结果没差个5-6倍"这样的结果? : 可是帮忙说明一下吗?? -- My immature blog http://www.wretch.cc/mypage/aggaci --

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