作者armyguy (～我们就是有分别)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请大家救我的real time PCR...
时间Tue Jul 10 00:48:34 2007
※ 引述《aggaci (I tried....)》之铭言：
: ※ 引述《kyokolove (心想事成)》之铭言：
: : 我最近做real time PCR
: : 当初这个基因我已经用RT-PCR 做过了
: : 想说用real time能更准确比较
: : 结果 我却跑不出结果 每次都是undetect
: : 我一共用了两种primer 一种是用primer3设计
: : 一种是RTprimerDB这个网站提供的
: : 可是两个网站都呈现出一样的结果--> undetect
: : 而且他们的曲线长的很奇怪
: : 都是在threshold以下 一直呈现锯齿状而有向上的趋势
: : 可是一直到40个cycle前都没有冲过threshold
: : 可是我的internal control GAPDH跑的很正常
: : 所以排除机器或是材料的问题...
: : 再说正常的曲线应该是会突然有暴冲几乎直线通过threshold的感觉巴
: : 请问有人有这种经验吗 这样的 曲线 undetect 代表什麽情况呢???
: : 请大家帮帮我~~~~~~~ 我已经重做快两个月了 Q ____ Q
: : 谢谢大家~~
: 是否有把QPCR玩的产物拿去跑电泳？
: 你的产物预期多大？
: 这很明显应该是没扩增出来...
其实我也有一个问题
就是我的real time pcr做的没有再现性
就算同一批sample做两次可能差异都不少
到底技巧在那里呢
RNA ratio不够高会不会有关系
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