※ 引述《K587262 (风......何时再起)》之铭言： : 请问板上的各位大大 有人做过利用RBL-2H3进行抗过敏的细胞模式吗 : 实验大致是利用anti-DNP IgE键结到RBL-2H3上的Fc receptor : 尔後加入DNP-BSA与IgE进行cross linking引发肥大细胞去颗粒化的反应 : 但是我实验怎麽作都无法诱导出细胞去颗粒化 : 利用cell lysis的确可以利用分光检测出去颗粒化酵素的存在 : 所以我不知道问题出在哪 想请问板上是否有人也在研究相关的实验 : 可以给我一点建议跟指导 谢谢 我用过BMMC做过 不过我是用loading IgE 之後用anti IgE 座crosslinking 不过我想使用DNP-BSA 来corsslinking specific IgE效果应该更好 想请问你测试的方法是啥?? 1. Ca++ influx? 2. B-Hex 3. histamine release?? 1.需要特殊的仪器 不过只要几颗细胞就可以了 之前研究过了一下 後来就因为太懒惰所以没做:P 我个人使用过的是2 and 3 2其实超快 两个小时就搞定拿数据 又便宜 但是问题是 我的感觉是他不是linear的 而且每个lab处理程序不太一样 导致% release其实很有问题 就是不同实验室做出来的数据其实不太能比较 而且 我同一批样品 测2汉3 计算出来的%就是有差阿 我看不懂你所说的degranulation enzyme存在是什麽?? 是说b-Hex? 还是??????? 我第一个想法是你的buffer是使用含有Ca 美离子的吗 用DPBS应该是无效 因为degranulation需要有钙离子存在 通常使用的就是tyroid buffer之类的 除了specific IgE之外 你可以用A23187/PMA Compound 48/80 来做control 对了ConA基本上就是人工corsslinking FceRI 也是可以用的 至少先找出 是assay出问题 还是他真的不会degradation 还有就是 有些细胞养太久 会lost FceRI expression 或者是impariment of FceRI signling 看到有人在做这题目真的觉的亲切阿..... 虽然RBL不算mast cell.... --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 68.254.13.137 ※ 编辑: cytospin 来自: 68.254.13.137 (07/08 14:03)