接不进去是最後只有vector only? and insert only两条band? 看看ligase别人用有没有问题 ligase buffer有无加错? 跟pneumonia大大说的一样 可能原因很多 我以前也用过这个vector 再多注意实验步骤中可能出错的部份才能找到原因 ※ 引述《[email protected] (JUAN)》之铭言： : ※ 引述《[email protected] (苍天之月)》之铭言： : > 最近在接 yeast two-hybrid 用plasmid : > 用的vector是pGBKT7 7.3kb : > map:http://0rz.tw/9d2My : > 接一个1.2kb的insert 切位 pst1 bamH1 : > PCR後单切 胶回收 再单切 再胶回收 : > 接的时候先45度C Denature Vector insert : > 再跟据跑胶ban的亮度去决定比例 : > total 20 ul : > 然後10~16度C 水浴 O/N : > 隔日transform到 DH5a 的E.coli中表现 : > 讲了这麽多....反正就是接不进去 : > 学长说可能是因为vector很长所以两端接不太到~~ : > 有克服的方法吗?? : 你这是cloning的技术问题 : 可能原因太多 : 回答不完 : 不过很少会碰到vector太长的问题 : 应该是其他问题 -- ★ ☆ / ★ ☆ / / ★ / ☆ / ★ ☆ ★ ☆ ★ ☆ 你是巨大的海洋 我是雨下在你身上 我失去自己的形状 我看到远方 爱情的模样 曾经孤单的旁徨 曾经相信曾经失望 你穿过重重的迷惘 那爱的慌张 终於要解放 你是谁 教我狂恋 教我勇敢地挑战全世界 在一样的身体里面 一样有爱与被爱的感觉 我爱谁 已无所谓 没有谁能将爱情划界限 在一样地身体里面 迷样的魔力却是更强烈 星星在夜空中闪亮 星空下我不停流浪 此生我无知的奔忙 因为你眼光 都化成了光亮 这世界全部的漂亮 不过你可爱的模样 你让我举双手投降 跨出了城墙 长出了翅膀 -- ╭──── Origin:<不良牛牧场> bbs.badcow.com.tw (210.200.247.200)─────╮ │ ↘ Welcome to SimFarm BBS -- From : [220.139.84.1] │ ╰◣◣◢ ◢◢《不良牛免费拨接→电话:40586000→帐号:zoo→密码:zoo》 ◣◣◢ ─╯