作者ostine (没有头绪)
看板Biotech
标题[问题] 有人用过Zymo Research的EZ DNA Methylation-Gold Kit吗?
时间Fri Jun 22 12:21:41 2007
这套kit 是以bisulfite来处理DNA，使DNA上的 C convert T
目前是万造代理。
我想问的是，在kit中附的protocol，有一段不太懂...
2. Place the sample tube in a thermal cycler and perform the following steps:
(1) 98℃ for 10 minutes
(2) 64℃ for 2.5 hours
(3) 4℃ storage "up to" 20 hours.
3. Add 600μl of M-Binding Buffer into a Zymo-Spin IC Column and place the
column into a privided Collection Tube.
到这里为止，只做到全部的一半
有疑问的是，步骤2中，up to 是什麽意思?因为字面上的意思应该是，一直到20个小时
但是他用storage这个字，所以不太确定这个步骤是不是必须的，我猜有两个意思:
(1) 必须在4℃中存放20个小时，才能往下面的步骤做
(2) 如果要中断实验，放4℃暂存最多只能存放20个小时
这两个意思有很大的差别，但是不知道哪个是正确的...orz
当初交我做的人，是告诉我第2个意思(所以通常只要时间够做完全部的部份，甚至直接
跳过4℃这个步骤，直接往下做)，但是我的直觉是第1个。
还想请问，如果跳过4℃没做，会有什麽结果?convert会不佳吗?(因为猜测4℃是为了中止
bisulfite的作用)
先谢过各位高手解答~~~
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◆ From: 140.129.77.13
1F：推 hunnan:我想是第二个意思吧 如果你要中断的话 可以停20小时 06/23 06:28
2F：推 showoff793:是第二个意思没错 4℃跳过也没什麽影响 06/23 17:39
3F：推 ostine:感谢回答，谢谢！！ 06/24 00:08