※ 引述《humwang (gogowang)》之铭言： : ※ 引述《aett (一个人旅行...)》之铭言： : : 不知道板上有没有大大用G418做MCF7 的stable clone? : : 因为我们实验室在筛选的时候 : : 当G418的药加入 就会大片死亡 : : 之後三周筛选出来的细胞并不会因为去掉G418而正常生长增生 : : 情况跟我在网路上找到一个人实验的情形是差不多的 : : http://www.bio.net/bionet/mm/cellbiol/1995-September/002800.html : : 可是这问题并没有人有回应 : : 另外一方面我在pubmed上面搜寻有关这方面的资讯 : : 也只有少数三四篇有做到 : : 可是似乎又没讨论到这些问题 : : 真是苦恼呀>"<~ : 有没有先试试看不要transfect直接先用不同浓度的G418先杀杀看? : 原则上以能在5天至一星期能将90-95%以上细胞杀掉的dose为佳 : 太低的话会有未被transfected的cells survive下来 : 太高的话, 细胞来不及表现相关的protein就被宰掉了 : 还有每个厂牌买到的G418的effect dose不尽相同 : 这也要注意一下 对啊！一定要先做 killing curve 喔! 如果不是药加太多 (一般来说会有一个 range，稍微多一点也不致於会死光光) 那就要回头考虑是 transfection efficiency 的问题 或者是你目前使用的 transfection method 对 MCF7 并不适合 先做看看 GFP 也是可以，不过个人的经验是 GFP 好的，未必我的 plasmid 就很好 相反的，GFP 只有 1% 发萤光的，我的 plasmid 并没有那麽差 --

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