作者ATKINS (ATKINS)
看板Biotech
标题[问题] E. coli表现纯化完之後有GroEL
时间Wed Jun 13 23:58:09 2007
我的cDNA是接在pET41上
上面有His tag和GST fusion
但是经过两个affinity tag的chromatography纯化之後
跑SDS-PAGE时发现除了我的target protein以外
就是有一个band一起存在 而且由SDS-PAGE看来量也不少
於是做in-gel digestion送MS之後
确认是GroEL 就是E. coli本身的chaperonin
这个protein就像我们所知的chaperone一样会形成complex来帮助folding
找资料试了一些方法 像是加MgATP处理
不过看来效果都不是很好 @@
不知道有没有人遇到过相同的问题可以一起分享一下吗
像是该怎麽处理或怎麽分离之类的.....
谢谢~~^^
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◆ From: 140.113.184.123
1F：推 wangba:两个protein分子量差很多的话 可以试着用分子量离心分开 06/14 01:08
2F：推 ATKINS:基本上它们是形成complex 所以分子筛会一起流出来 T_T 06/14 01:36
3F：推 csardas:Hydrophobic Interaction chromatography or 06/14 07:13
4F：→ csardas:Ammonium sulfate precipitation 06/14 07:14
5F：推 ATKINS:感谢楼上的建议，希望实验能成功 ^^ 06/14 20:27