作者u8524009 (VIP好人卡....)
看板Biotech
标题Re: [问题] luciferase assay system的internal co …
时间Mon Jun 11 22:26:18 2007
※ 引述《swiker (呼~)》之铭言：
: 想请问板上各位高手
: 是否有人luciferase assay 是用GFP当internal control
: 因为我lyse细胞之後去测GFP的值都跟background差不多(大概100上下)
: 这样就几乎等於没有表现了..但我luciferase的值非常高
: 所以我去确定我的transfection efficiency不差
: 因为测luciferase activity一定须将细胞lyse完全才能测到较好的值
: 因此怀疑GFP是否在lyse细胞的同时也会失去它的活性
: 请有经验的高手帮忙解惑
: 谢谢~~~
我也是用EGFP当internal control
GFP的值超高的,并不会因为lysis细胞的步骤而失去活性
建议你在lysis之前先用萤光显微镜看一下GFP是否有表现
另一个可能性是你的测量萤光的波长选错了,GFP是绿光,你可能选到红光或其它的..
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.114.96.172
1F：推 ldy:那请问YFP会因为lysis的步骤而失去活性吗? 06/11 23:03
2F：→ ldy:其实我只要western的时候antibody认得到就好 06/11 23:04
3F：推 u8524009:理论上做western的蛋白质都是denature form的,除非你的抗 06/11 23:06
4F：→ u8524009:体有特别注明是认native form的,不然western应该都认得到 06/11 23:07
5F：推 ldy:我是怕照到光然後YFPdegrade掉而影响我的定量 06/11 23:34