作者yaliu (似乎要花大钱了~~~)
看板Biotech
标题Re: [求救] 有人有用过T4 DNA polymerase吗？
时间Sat Jun 9 17:55:53 2007
※ 引述《hsejotim (小石头)》之铭言：
: ------------------------------------------------------------------------------
: T4 DNA polymerase可以让Sticky end平滑化(blunting)
: (有两个不同的sticky end想要用blunting方式)
: 之後想ligation起来(T4 DNA ligase)
: 可是并没有成功
: 想请问各位大大有谁用过的经验或撇步
: 提供给我参考看看吧
: 谢谢^^
提供你一个方向
但我不晓得会不会成功
在molecular cloning里
先70度加热5~10min，使single strand(突出的一股)的部份不会自己黏起来
然後放冰上一下
之後再加入dNTP和T4 DNA polymerase，在37度里培养15分钟
你可以试试看...
可是我觉得，如果可以的话，把它们都弄成有同样的restriction enzyme切点
sticky end应该比较好接吧.....
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 163.14.184.57