作者freesoul (寻找生命的出口)
看板Biotech
标题Re: [问题] real-time PCR
时间Thu Jun 7 11:48:47 2007
没用过你们那台机器 所以不知道选duplicate的问题怎麽解决
至於会有测不到的 十之八九通常都是pipetting的问题
最快的解决办法就是不要偷懒，乖乖作master mix
拚一点的话一整组(duplicate或triplicate，我建议最好都是作triplicate)
连template在内都是加到master mix後再分
大概说一下我是怎麽作的好了
假设一个control两个exp，一个b-actin一个target gene
这样总共会有9 x 2 x 3(trilicate) + 2(blank) 管
扣掉primer和template其他reagent先整个作一个master mix
分两半加primer後先各取一管blank的出来
其他各分三组加template
最後才从每一组的master mix里分到pcr tube里
这已经是最龟毛的做法了
可是出来结果偶而还是会有差到两个cycle的
real-time是非常非常sensitive的~~ XD
再来data analysis我都是拿出来自己用excel算
这样机器只要知道哪个是blank就可以
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