作者mournermind (阿蒙)
看板Biotech
标题[问题] vector 为pQE30的colon
时间Thu Jun 7 00:16:24 2007
我将pQE30的His tag接在我insert表现淡白的N端
定序过後有看到his tag的序列
induction後也有表现
不过做纯化後却发现sample才一倒入 我要的protein绝大部分就被elute出来了
另外有一些protein则是在加入binding bf 以及wash bf时被elute出
反正在我加入elution bf後没有东西出来
我在想会不会是
1.我的蛋白大概38KD左右他的结构把his tag遮住了(adhesin protein)
2.binding bf中的imidazoid浓度太高(实验室其他人用过说她们用OK的浓度)
会有其他原因吗?
我可以如何做来使protein和resin的作用能力变好ㄚˊˋ(说可以试试看imidazoid
= 0 mM @@? 或是10mM)
我个人认为我要的蛋白还是和resin有作用能力的
因为在用wash bf冲洗时还有产物会出现... ...
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