看板Biotech
标 题Re: [求救] Polyacrylamide/7M urea gel 超黏拔不起来呀
发信站清华生命科学 BBS (Wed May 30 22:48:03 2007)
转信站ptt!Group.NCTU!grouppost!Group.NCTU!nthuls
※ 引述《[email protected] (盒装鸟人)》之铭言：
> 因为要分离siRNA(20~23nt),所以配置了15%polyacrylamide gel/7M Urea ,
> 配方如下:
> http://www.genetics.ucla.edu/labs/fan/Protocols_MicroRNA.htm
> 40% Acrylamide 18.75 mL
> 5x TBE Buffer 5 mL
> dH20 10 mL
> Urea 21 g
> 10% APS 400 ul
> TEMED 40 ul total体积50ml
> ps: Acrylamide我并没有加bis-acrylamide
> 铸完後1个小时左右,我去没去跑胶,先拆胶起来看看gel是否有问题
> 拔玻璃片的时候就不是很好拔了,但用buffer湿润後就可以顺利的把玻璃片拔开,
> 但是gel却整个都紧紧黏在白色的板上,感觉gel是有凝固,
> 但是....就是无法把他由白色的板上取出.gel是呈现一种很黏很黏的状态,
> 用tip去戳它还会牵起丝来.... (￣□￣|||)a
> 我查了几篇配制gel的文章,
> 有些Acrylamide会写要加19:1的bis-acrylamide进去,但有些就不会特别着名要加.
> 而Urea从6M~8M的都有,至於10% APS与TEMED的量则各有个的喜好.
> 我算了一下这次用的配方,其实并没有超出固定范围内.
> 可以请教一下有配制过高浓度denaturing polyacrylamide-urea gels的先进们,
> 我的配方有错误的地方吗?或者铸这种gel最佳的配方大家都用多少比率呢?
> 先行感谢大家拨亢回答呀
没有加bis你得到的是线状的polyacrylamide
所以会呈现黏稠状
bis一定要加
加的比例越高
孔洞越小
越适合跑小分子
--
※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
◆ From: 61-59-139-151.adsl.static.seed.net.tw