※ 引述《ppta (幸福的瞬间)》之铭言： : 有三个基因我做了好久，只有偶而才做得出来，大多完全做不出来喔，麻烦各位高手指点我 : 一下，这三个基因包含後来做的两个基因，我的试剂配法均如下： : dna 3（未定量）、buffer 2.5入 primer（10 pmol/入）各2.5入 dntp（2.5mM）4入 : 、taq（5u/入）0.5入，水10入。 : 而且因为一直做不出来我还学版友把40cycle的程式均改成1分三十秒还是没东西 : drd3曾经做出来过，用的primer是寒假时订的。程式如下： : 95 6分，94 1分 55 30s 72 45秒 共跑40cycle， 72度10分，annealing温度後来我降 : 成50度还是没东西。但是50跟55度我都曾经跑出过东西来。paper写的annealing温是55度 : a218c : 94度四分，94度30秒、50度30秒（後来也有改过59度、56度、53度，56、53度均有跑出过 : 东西）、72度1分，共40cycle、72度10分。paper写的 annealing温是55度。有尝试将 : dna含量调成5入及1入，但仍没东西。 : serotonin transporter : 94度5分、94度30秒、63度30秒（後来改成50、55度还是跑不出来）、72度30秒、共40cycle， : 72度5分，之前63度时曾经跑出很亮的band，但现在..........paper写的 annealing是 : 63度至55度间。 : 这三个基因是我寒假做的，大多做不出来，偶而才做得出很弱的band，但我後来订的两个 : 新基因，用一样的材料一下子就成功了，也是用annealing温50度做，其中一个比较不亮， : 打算提高一下温度，另一个则超亮的。 : 现在我只想到还没尝试拿别人的试剂来试，其他想不到了，高手们能不能救救我。 自问自答好了，现在我终於找出原因了，原来问题出在dna身上，现在找出问题我不知道 该哭还是该笑，高兴的是总算找出原因，但难过的是我为了这个无聊的原因浪费了两个月 。如果我不要太害怕跟老师沟通，都闷着问实验室的同学，我想我现在应该口试完毕了吧。 就在所有方法都试遍後，只好老师地跟老师沟通，老师拿了十五个三、四年前萃取的dna， 他说他萃得很好，叫我拿去与我用来做实验的dna用0.7%的gel跑跑看，竟然发现我的dna 似乎没东西。所以我拿老师给我的dna来做实验，一次就做出来了，还有杂band呢，天啊。 想要节省麻烦，懒得泡0.7%的胶来跑，总是觉得曾经p出来过，所以一直觉得是条件及基因 太难做的问题，结果造成更多的麻烦。虽然真的曾p出来过，而且很微弱，再加上学弟给的 dna是他最近萃而且p出来很亮的，但总之就是不大好用就是了。 虽然这课学得有点晚，但是以後跑pcr前，一定要先确认dna的浓度啊，即使没有定量的设 备，也要先跑一下gel啊。 搞笑了，虽然我笑不出来。不过，真的谢谢这段时间给我建议的各位高手，谢谢。 --

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