作者Bluecold (黑特版比就可版好笑)
看板Biotech
标题[问题] pull-down与IP的讨论
时间Thu May 24 17:34:58 2007
各位版友大家好
现在我正在进行IP 期待利用A protein 的Ab
可以将A protein precipitate的同时
也将跟他作用的B protein precipitate下来
A与B protein之前利用GST-B protein与purified A protein
进行pull-down以後 发现的确是有direct interaction
但是刚刚利用IP却发现他们之间没有interaction?
怪哉
不知道版友会怎麽解释这个问题?
我现在在猜想
1. 是否我的lysis buffer中含有太高浓度的detergen(2.5% CHAPS)
导致干扰了A-B interaction?
2. 我还没wash 光是在cell lysate刚load进去 离心以後就掉了
因此我想不会是wash的问题 所以直接想说是binding的条件不对?
因为我是用PIERCE的seize X protein A immunoprecipitation kit做的
接下来会想先降低我的detergen浓度再试一次
假如各位版友看到这样的结果 会怎麽解释?
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