※ 引述《ppta (幸福的瞬间)》之铭言： : 有三个基因我做了好久，只有偶而才做得出来，大多完全做不出来喔，麻烦各位高手指点我 : 一下，这三个基因包含後来做的两个基因，我的试剂配法均如下： : dna 3（未定量）、buffer 2.5入 primer（10 pmol/入）各2.5入 dntp（2.5mM）4入 : 、taq（5u/入）0.5入，水10入。 : 而且因为一直做不出来我还学版友把40cycle的程式均改成1分三十秒还是没东西 : drd3曾经做出来过，用的primer是寒假时订的。程式如下： : 95 6分，94 1分 55 30s 72 45秒 共跑40cycle， 72度10分，annealing温度後来我降 : 成50度还是没东西。但是50跟55度我都曾经跑出过东西来。paper写的annealing温是55度 : a218c : 94度四分，94度30秒、50度30秒（後来也有改过59度、56度、53度，56、53度均有跑出过 : 东西）、72度1分，共40cycle、72度10分。paper写的 annealing温是55度。有尝试将 : dna含量调成5入及1入，但仍没东西。 : serotonin transporter : 94度5分、94度30秒、63度30秒（後来改成50、55度还是跑不出来）、72度30秒、共40cycle， : 72度5分，之前63度时曾经跑出很亮的band，但现在..........paper写的 annealing是 : 63度至55度间。 : 这三个基因是我寒假做的，大多做不出来，偶而才做得出很弱的band，但我後来订的两个 : 新基因，用一样的材料一下子就成功了，也是用annealing温50度做，其中一个比较不亮， : 打算提高一下温度，另一个则超亮的。 : 现在我只想到还没尝试拿别人的试剂来试，其他想不到了，高手们能不能救救我。 请问annealing温度最低能降到多少啊，是不是低一定做得出东西（就是说低做不出来， 高一定也做不出来，纯就annealing温来考量，假设其他条件是正确的话），能不能告诉 我一下最低的annealing温，我想直接冲一下最低的annealing温，把这个条件固定住，再 来改其他的条件。有杂band没关系，天知道我多想看一看杂band来改进啊。 --

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