作者kayle (JoBette啦~~~)
看板Biotech
标题[求救] 蛋白质纯化後多一个band
时间Thu May 17 20:51:07 2007
有人遇过吗
我用 his bind resin纯化protein後再跑SDS PAGE
发现elute下来的protein在约大个5kd左右的地方多了一个band
(不是2倍大小的dimer polymer之类的)
W: whole cell , C: cytosolic fraction , I:inclusion body fraction
P: urea 处理离心後pelle , E: elute fraction
M W C I P E
40kDa ─
─ ─ ˍ ▅ ▁ ← 哪里来的
＿
▃ ▂ ← 哪里来的
30kDa ＿ ─
▆ ▅ ▅ ▅ ← recombinant protein
─
明明whole cell fraction很清楚看到induction出来的protein
用urea溶解inclusion後尤其是纯化後却出现3个band
看起来好像是urea处理後不知道发生什麽事
但我之前处理过其他clone都没遇过这个问题
而且它的size又比较大应该不是被protease digest掉
如果说是sample没处理好
whole cell 部分也是很清楚的一条band
我已经想不出来问题出在哪里??????
那两个protein到底从哪里生出来的????
有人遇过吗????????? 帮个忙啊~~~~~ 感谢!!!!!!
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◆ From: 59.121.114.187
1F：推 liuse:是用Ni-resin抓的吗? 是的话会抓一些有的没的 05/18 01:21
2F：→ shuyanc:我也觉得Ni NTA有时纯化的杂protein有点多。 05/19 09:39