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标 题Re: [问题] pcr及电泳的问题.......
发信站清华生命科学 BBS (Sun May 13 20:00:44 2007)
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※ 引述《[email protected] (问个问题)》之铭言:
> 一、我做的基因是人类的drd2、TPH、5-HT2C、ADRA2A、serotonin transporter等基因,
> 想请问一下各位高手,有没有那个资料库能查询这些基因的电泳图的呢?除了找paper这个
> 方法之外,有无这种电泳资料库呢?对了,我做的基因都是人家做过的。
> 二、我的电泳结果老是很弱,甚至比primer dimer还弱,请问我能怎麽改进呢?降低
> annealing温度(可是已经降到50度了耶)、换dna(因为dna老旧吗?)、稀释dna?或是
> 减少DNTP的量(因为会抢镁离子吗?)?这些我都还没试过,还有其他方法吗,这些方法
> 的测试优先次序为何?补充说明我的DNA是口腔棉棒萃取出来的。
> 三、老师跟我说pcr产物要很亮很强才能做RFLP,请问这是真的吗?是不是切出来之片段
> 还会更弱所以看不到呢?还是说产物不够亮有变通方法呢?
> 四、爬文发现有些试剂重复冻、融会严重影响实验结果,所以应分装,所以DNA要分装,那
> dntp、buffer也会有这麽严重的影响吗?还是说上述两者较不易坏?
别人的电泳图通常不会有甚麽用处
可能失败的原因太多 扯不完
必须先找一个positive control
譬如说从周边白血球或细胞株抽取大量DNA
如果仍然做不出来 再考虑PCR条件改善
dNTP和buffer较耐冻
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※ Origin: 生命科学 BBS <bbs.life.nthu.edu.tw>
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