※ 引述《studyno1 (汲取知识)》之铭言： : 我现在用的是E1A-transformed MEF cell 所以有immortality 特性 : 当细胞长满的那一天(day 0)我开始加induction medium 2 天 : induction medium:1% P/S : 10% FBS : 0.5mM IBMX : 1uM Dex : 10ug/ml insulin : 10uM troglitazone : DMEM : 两天後换成含10ug/ml insulin. 1%P/S. 10%FBS的DMEM : 之後我发现medium的颜色变化很快速 所以我必须每天换含insulin medium : 我的问题是 不知道是否当初day 0的细胞就太满(9成以上甚至全满) : 还是我的induction medium某成分浓度过高 : (我看过有些paper 用的insulin浓度是我的一半) 你药加的很重 不过也无妨,这样才分化的好,但是这样就真的就是天天换了 : 我发现细胞induction後 会快速增长 然後似乎失去adhesion能力 细胞会整片飘起 : 导致後来在每天换medium的时候 一不小心 细胞就整片飘起 : 我应该怎麽改进我的实验流程? 你的plate是哪一家的,做这种建议非falcon不用 : 现在只想到一开始要induction时的细胞就不要太满 : seeding细胞後到底要多满作比较好呢? 我的经验是要确实满 seeding直接五分满(多少细胞叫满自己去查面积),隔天就当做满 有些人甚至会长满多等两天再induction 为的就是保证contact inhibition/arrest 当然你可以不信,但不妨试试看 你加medium怎麽加?直接加吗?我是沿壁慢慢加,尽量不直接冲到细胞 这可不比癌细胞 --

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