我现在用的是E1A-transformed MEF cell 所以有immortality 特性 当细胞长满的那一天(day 0)我开始加induction medium 2 天 induction medium:1% P/S 10% FBS 0.5mM IBMX 1uM Dex 10ug/ml insulin 10uM troglitazone DMEM 两天後换成含10ug/ml insulin. 1%P/S. 10%FBS的DMEM 之後我发现medium的颜色变化很快速 所以我必须每天换含insulin medium 我的问题是 不知道是否当初day 0的细胞就太满(9成以上甚至全满) 还是我的induction medium某成分浓度过高 (我看过有些paper 用的insulin浓度是我的一半) 我发现细胞induction後 会快速增长 然後似乎失去adhesion能力 细胞会整片飘起 导致後来在每天换medium的时候 一不小心 细胞就整片飘起 我应该怎麽改进我的实验流程? 现在只想到一开始要induction时的细胞就不要太满 seeding细胞後到底要多满作比较好呢? 可否请有做过的前辈为我指点迷津?谢谢你们^^ --

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