作者shuyanc (赶快做出来吧！)
看板Biotech
标题Re: [问题] RFLP~
时间Sat May 5 18:16:48 2007
※ 引述《kaifish (喔.....................)》之铭言：
: ※ 引述《mona210 (喔屋)》之铭言：
: : PCR 所得到的 DNA 片段中一个EcoRI的切割位置，而某噬菌体中有五个EcoRI切割位置，
: : 那我应该加入多少体积酵素才能在一小时内把1μg实验用的DNA给完全切割?
: : ( EcoRI酵素浓度约为10 U/μl )
: : 我想要知道怎麽算....
: : 因为自从上次那个"初学者问题"
: : 有时对自己会有点没信心 ^^"
: : 希望板上的老手or高手能帮帮忙
: : 谢谢^^~
: 你的酵素是跟NEB买的吗?
: 根据NEB的酵素unit的定义是
: 1 U = digest 1ug DNA in an hour
: 所以基本上如果你想在一小时内将你的实验DNA完全切割
: 取 1 U 应该够(换句话说就是 0.1 uL)
其实如果不放心的话，酵素可以多放一些啦！
但 EcoRI 会有 star activity
使用时需注意 glycerol 浓度小於 5% (加入之酵素量小於总体积的十分之一)
pH<8.0 (使用酵素附的 buffer 就是了)
--
※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 124.8.96.169