※ 引述《cytospin (My Ernest)》之铭言： : 各位先进好 : 小妹最近开始想做confocal : 得到的资讯大多是fix细胞的步骤 : 可是我想要做那种看到protein internalization然後被derade掉的 : 所以要做活细胞影像 : 不过有几个问题 想问一下有做过的人 : 我的细胞是suspension cell : 我想看的是cKit (RTK) mutant 他会自动林酸化然後turn over : 加药物之後 cKit会不稳定然後 cKit expression就消失了(on western) : 想请问一下 1. 活细胞影像的fix 还有打洞 使用的Material ?? : 如果是fix的细胞 是4% paraformadehye + 0.5% Triton X100 : 活细胞要用啥ㄌㄟ ?? 又不会弄死细胞又可以intracellular stain的 : 2. 如果我有抗体bind cKit -->会不会影响他internalization?? : 我不清楚我的抗体会部会block cKit function yet... : 先这样..感恩....请各位先进给点意见 (硕一时做过一阵子suspension cell的live image 吃了些苦头:p) 就印象所及 细胞fix再打洞後 要活着似乎有点难度 建议可以查一下paper是否有人做过类似的实验。 另外一点是confocal 如果你要给细胞一个可以快乐发挥应有function环境 观察时要有足够的medium，适当的温度，当然能提供CO2是更好的！ 而可能需要检查一下你所使用的confocal是否具备能外加这些装置的条件。 (为了不要让共轭焦的雷射光源过热，显微镜室的冷气会很强，根据我的经验， 细胞一冷，就不理你了....T__T) suspension cell由於不会很紧密的贴附在盘子或是玻片上 所以　再调焦距的时候会有点难度，也很容易跑掉， 在拍image的时候　人最好要随时顾在机器旁边～ (可以试着在玻片上coating fibronectin或是cortactin，有些细胞会有不错的效果!:)) --

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