MEF我有养过 提供一下我passage的方法给你参考看看 先倒掉medium後用PBS wash，10cm dish加1 ml 0.25%trypsin-EDTA 放置incubator 中作用2min，再加至少等量的medium去中和trypsin的作用，吸至50ml tube中离心， 去除trypsin,虽然meduim可以中和掉trypsin的作用，但其中和作用时间多长并不清楚， 所以习惯上我都会把trypsin离掉，离心完到掉上清液之後先加入1ml medium， 用tip去pipe，把细胞打散後再加入19ml medium，这样可以分两盘，然後要分到dish 之前再用吸管pipe均匀，这样细胞就可以长得很好罗!!这是我的方法，希望对你有帮助 ※ 引述《[email protected] (汲取知识)》之铭言： > ─────────────────────────────────────── > 我养的是MEF cell 今天早上subculture > 刚刚看了一下 发现我没有把细胞均匀分布在dish中 > 所以有些区域细胞较多 有些就很少 > 我的方法是先将适当体积的medium 加在dish > resuspend trypsin作用後的cell後 再依适当的spilt ratio > 取出细胞液加在刚刚有medium 的dish 然後前後左右摇晃dish 让细胞均匀分布 > 可是显然这样的方法无法让细胞很均匀分布 猜测可能我过度摇晃 反而让细胞不均匀 > 我的问题是 > (1)早上subculture 现在看来细胞已经贴了 > 我可以今天晚上再把细胞打起来让他分布均匀吗? 对细胞会不会造成影响? > (2)可以请大家提供一下subculture後让细胞均匀分布於dish的方法吗? > 谢谢回应^^ -- ╭─ Origin ─╗ 新绿园 bbs.sa.ncyu.edu.tw ～ κλμ ─┤ ├ Author ╡ 218-171-143-19.dynamic.hinet.net