※ 引述《studyno1 (汲取知识)》之铭言： : ※ 引述《boyo (29大头)》之铭言： : : MEF是mouse embryonic fibroblast吧 : : 你的作法是不是漏了一步?? : : MEF大部分的用途是用作ES cell的feeder : : 所以MEF贴dish贴平均非常重要 贴不平均你的ES cell就很容易分化 : : 你加medium的用途是要inactivate trypsin的作用 : : 加完後要用pipet把dish上的细胞冲乾净 : : 再吸到15cc tube "pipet几次 打散细胞" <--你是不是少这步骤 : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^请问这步骤是specific for MEF 吗? 还包括mouse and human ES cell MEF 跟 ES cell的处理跟其搭种类的cell line很不一样 一般在处理MEF的时候 从第一代养到第五代就差不多是极限了 第五代就要用Mito.C treat 然後冻起来或直接用 13.5天那取胚胎做MEF的过程做的好 是一次可以用好几年的 这是题外话 如果你要养ES cell 那这步非做不可 MEF不小心没打散 了不起贴不平 下面还一层gelatin ES没打散就很危险 会提高分化的百分比 而且 trypsinize 冻解冻 medium stock 所有的condition品质都要控制的很严谨 才能将分化的细胞控制在一定范围内 我之前是在做in vitro differentiation 现在在做knock out mice 但是不管是实验的哪一部份 决定成败的关键都在ES cell culture这一环 : 从大学到硕班 老师学长姐教subculture都没有这个步骤耶 : 都是加完trypsin-EDTA後RT静待一下(或放incubator一会儿) 然後轻拍dish : 或是直接用pipet把细胞冲下来 收集细胞液到离心管就直接离心了耶 : 我只有这个步骤不太一样 其他都相同 : 加了这步骤的目的是什麽? : : 打散完後再去离心 算准要passage多少细胞後 : : 吸去废液 再加medium去pipet打散pallet : : trypsin-EDTA的作用是只是化学性的 你也要加一些物理性的作用 : : 就是用手打散细胞 : : 十字摇匀的 看你的步骤应该没问题 不过记得摇的时候 : : 前後摇完 要等液面不再晃动再左右摇 不然细胞都在原地散步 : : 有问题再问吧 -- 如果孔子是那待沽的玉 我便是待斟的酒 用一生的时间 蕴酿自己的浓度 只为等待刹那的倾注 张晓风 酿酒的理由 --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 221.169.50.122 ※ 编辑: boyo 来自: 221.169.50.122 (05/02 00:41)