※ 引述《mimosasky (浪者天涯)》之铭言： : 我们也会利用pipet打散细胞 : trypsin切下後细胞并不见得会呈现"个体"状态 : trypsin可能是把细胞"整片"切下 : 所以要再用pipet"尽量"让它们完全均匀分布在medium中 : 但跟各位前辈不同的地方是, 我们没有再离心去废液 : 这目的是...?! 这个方法我也试过 也曾在BCRC上看过这样的作法 其实理论上加入的culture medium就可以中和trypsin的作用了 所以不用再离心吸去上清液也可以 依照我个人经验 比较过离心与不离心 发现离心後的细胞贴附的状况较好 长的也较好 不过这是在我的cell model下 总是要用对自己细胞比较好的方式 所以不放心的话那就都试试 看看对细胞有没有影响 而且再离心也可以吸掉一些死细胞的细胞碎片或其他悬浮物 细胞生长的background会比较乾净 以上是自己的经验 参考看看罗 : 在较大的dish中比较不会发生细胞分布不均的情况 : 通常只会在较小的well中发现 : 但保险起见 : 我们会先知道该细胞完全贴附的时间(我们的约30分@@a) : 在这时间内会偶尔去给它摇个几下(约隔10分钟左右吧) : 摇的方法也尽量避免让它的液面呈漩涡状转动 : 可以左右各让它倾斜几秒钟, 再前後几秒钟 : 这样子~我们家的细胞老大都还满听话的 : 也很少看到有"聚赌"的情形= =||| : 以上参考~~ : ※ 引述《studyno1 (汲取知识)》之铭言： : : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^请问这步骤是specific for MEF 吗? : : 从大学到硕班 老师学长姐教subculture都没有这个步骤耶 : : 都是加完trypsin-EDTA後RT静待一下(或放incubator一会儿) 然後轻拍dish : : 或是直接用pipet把细胞冲下来 收集细胞液到离心管就直接离心了耶 : : 我只有这个步骤不太一样 其他都相同 : : 加了这步骤的目的是什麽? --

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