我们也会利用pipet打散细胞 trypsin切下後细胞并不见得会呈现"个体"状态 trypsin可能是把细胞"整片"切下 所以要再用pipet"尽量"让它们完全均匀分布在medium中 但跟各位前辈不同的地方是, 我们没有再离心去废液 这目的是...?! 在较大的dish中比较不会发生细胞分布不均的情况 通常只会在较小的well中发现 但保险起见 我们会先知道该细胞完全贴附的时间(我们的约30分@@a) 在这时间内会偶尔去给它摇个几下(约隔10分钟左右吧) 摇的方法也尽量避免让它的液面呈漩涡状转动 可以左右各让它倾斜几秒钟, 再前後几秒钟 这样子~我们家的细胞老大都还满听话的 也很少看到有"聚赌"的情形= =||| 以上参考~~ ※ 引述《studyno1 (汲取知识)》之铭言： : ※ 引述《boyo (29大头)》之铭言： : : MEF是mouse embryonic fibroblast吧 : : 你的作法是不是漏了一步?? : : MEF大部分的用途是用作ES cell的feeder : : 所以MEF贴dish贴平均非常重要 贴不平均你的ES cell就很容易分化 : : 你加medium的用途是要inactivate trypsin的作用 : : 加完後要用pipet把dish上的细胞冲乾净 : : 再吸到15cc tube "pipet几次 打散细胞" <--你是不是少这步骤 : ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^请问这步骤是specific for MEF 吗? : 从大学到硕班 老师学长姐教subculture都没有这个步骤耶 : 都是加完trypsin-EDTA後RT静待一下(或放incubator一会儿) 然後轻拍dish : 或是直接用pipet把细胞冲下来 收集细胞液到离心管就直接离心了耶 : 我只有这个步骤不太一样 其他都相同 : 加了这步骤的目的是什麽? : : 打散完後再去离心 算准要passage多少细胞後 : : 吸去废液 再加medium去pipet打散pallet : : trypsin-EDTA的作用是只是化学性的 你也要加一些物理性的作用 : : 就是用手打散细胞 : : 十字摇匀的 看你的步骤应该没问题 不过记得摇的时候 : : 前後摇完 要等液面不再晃动再左右摇 不然细胞都在原地散步 : : 有问题再问吧 --

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