※ 引述《boyo (29大头)》之铭言： : ※ 引述《studyno1 (汲取知识)》之铭言： : : 我养的是MEF cell 今天早上subculture : : 刚刚看了一下 发现我没有把细胞均匀分布在dish中 : : 所以有些区域细胞较多 有些就很少 : : 我的方法是先将适当体积的medium 加在dish : : resuspend trypsin作用後的cell後 再依适当的spilt ratio : : 取出细胞液加在刚刚有medium 的dish 然後前後左右摇晃dish 让细胞均匀分布 : : 可是显然这样的方法无法让细胞很均匀分布 猜测可能我过度摇晃 反而让细胞不均匀 : : 我的问题是 : : (1)早上subculture 现在看来细胞已经贴了 : : 我可以今天晚上再把细胞打起来让他分布均匀吗? 对细胞会不会造成影响? : : (2)可以请大家提供一下subculture後让细胞均匀分布於dish的方法吗? : : 谢谢回应^^ : MEF是mouse embryonic fibroblast吧 : 你的作法是不是漏了一步?? : MEF大部分的用途是用作ES cell的feeder : 所以MEF贴dish贴平均非常重要 贴不平均你的ES cell就很容易分化 : 你加medium的用途是要inactivate trypsin的作用 : 加完後要用pipet把dish上的细胞冲乾净 : 再吸到15cc tube "pipet几次 打散细胞" <--你是不是少这步骤 ^^^^^^^^^^^^^^^^^^^请问这步骤是specific for MEF 吗? 从大学到硕班 老师学长姐教subculture都没有这个步骤耶 都是加完trypsin-EDTA後RT静待一下(或放incubator一会儿) 然後轻拍dish 或是直接用pipet把细胞冲下来 收集细胞液到离心管就直接离心了耶 我只有这个步骤不太一样 其他都相同 加了这步骤的目的是什麽? : 打散完後再去离心 算准要passage多少细胞後 : 吸去废液 再加medium去pipet打散pallet : trypsin-EDTA的作用是只是化学性的 你也要加一些物理性的作用 : 就是用手打散细胞 : 十字摇匀的 看你的步骤应该没问题 不过记得摇的时候 : 前後摇完 要等液面不再晃动再左右摇 不然细胞都在原地散步 : 有问题再问吧 --

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