※ 引述《studyno1 (汲取知识)》之铭言： : 我养的是MEF cell 今天早上subculture : 刚刚看了一下 发现我没有把细胞均匀分布在dish中 : 所以有些区域细胞较多 有些就很少 : 我的方法是先将适当体积的medium 加在dish : resuspend trypsin作用後的cell後 再依适当的spilt ratio : 取出细胞液加在刚刚有medium 的dish 然後前後左右摇晃dish 让细胞均匀分布 : 可是显然这样的方法无法让细胞很均匀分布 猜测可能我过度摇晃 反而让细胞不均匀 : 我的问题是 : (1)早上subculture 现在看来细胞已经贴了 : 我可以今天晚上再把细胞打起来让他分布均匀吗? 对细胞会不会造成影响? : (2)可以请大家提供一下subculture後让细胞均匀分布於dish的方法吗? : 谢谢回应^^ MEF是mouse embryonic fibroblast吧 你的作法是不是漏了一步?? MEF大部分的用途是用作ES cell的feeder 所以MEF贴dish贴平均非常重要 贴不平均你的ES cell就很容易分化 你加medium的用途是要inactivate trypsin的作用 加完後要用pipet把dish上的细胞冲乾净 再吸到15cc tube "pipet几次 打散细胞" <--你是不是少这步骤 打散完後再去离心 算准要passage多少细胞後 吸去废液 再加medium去pipet打散pallet trypsin-EDTA的作用是只是化学性的 你也要加一些物理性的作用 就是用手打散细胞 十字摇匀的 看你的步骤应该没问题 不过记得摇的时候 前後摇完 要等液面不再晃动再左右摇 不然细胞都在原地散步 有问题再问吧 -- 如果孔子是那待沽的玉 我便是待斟的酒 用一生的时间 蕴酿自己的浓度 只为等待刹那的倾注 张晓风 酿酒的理由 --

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