作者dropdred (keep the faith)
看板Biotech
标题Re: [问题] PCR夹GC rich region
时间Thu Apr 19 18:36:59 2007
※ 引述《dropdred (keep the faith)》之铭言：
: 最近在夹GC rich的位置,约80%
: amplicon约650bp
: primer是用primer3设计的,Tm=60度
: 试过AmpliTaq, 在60度跟touchdown会夹出约300bp的片段
: 但在升温上去68度就什麽都没有了...连残存的primer都看不见
: 另外,还试了AmpliTaq Gold
: 更惨,不论是60, 65, 68度
: 什麽都没有...整块胶只有marker
: 想请问大家的经验....感激不尽!!
来跟大家报告一下进度
老板拿了一组叫做FailSafe Premix Selection Kit
好像是波斯特在卖的吧
里头有12种premix
据说明书上写...就是MgCl2跟Betaine浓度上的差异
然後...我用60度去跑
12种都试
有...就是那个band...
再其中一种premix 有夹出我要的大小
不过量很少
看来AmpliTaq Gol被击败了
hotstart enzyme似乎没办法征服GC rich
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◆ From: 61.228.207.175
1F：推 dorphilvet:你可以试着在pcr里加1ul的DMSO，他可以打开GC rich 04/21 00:09