※ 引述《lysa (上台北了)》之铭言： : ※ 引述《aggaci (reject！又reject！)》之铭言： : : 先确定你的AB可以作EMSA : : ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ : 我买的Ab是sc-186x,所以应该是可以做EMSA的 你如何知道呢？satacruz的datasheet不准，他每只都说可以 : positive control : : 用CREB铁定会binding的probe作EMSA，再测试Ab能否supershift成功 : ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~ : 这我不太懂,要怎麽确定这probe是creb一定可以binding的?不是要用Ab check吗? 如PAPER已经发表的确定此段DNA CREB一定可以binding 或是你用的competitor 你不是说你有CREB的oligonucleotide吗？ positive control？懂吗？ 举个例子 若此CREB probe(当positive control)可以supershift成功 但你的probe不行 纳表示你的probe可能不是CREB结合在上面 请节哀 若两组都不行，那表示你supershift条件没抓到，或抗体有问题 通常supershift我习惯买两支不一样的抗体来作 以避免某些protein不是抓不到而是被挡到了 : : 看PAPER用这只抗体都是用什麽条件？ : : 先加抗体？後加抗体？跟probe一起加？放冰上吗？ : paper看过了...所有的情况都有试过.....包括前加後加抗体,室温下或冰上等 : 我想再请问板上的EMSA达人,在binding的过程中 : 有没有先加cold probe会有差别吗? : 我都是cold probe跟hot probe同时加的... : 还有请问有专门写EMSA的专书吗??? : 因为我不是读分生本科系出来的 : 　　很多都很不懂。。。麻烦请大家解答罗！！谢谢！！ 先加的倍数会比较低10x-50x 一起加的倍数较高 100x-1000x都有 一样，竞争的实验negative & positive control都要有！ --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.114.100.165 ※ 编辑: aggaci 来自: 140.114.100.165 (04/17 22:42)