作者lysa (上台北了)
看板Biotech
标题Re: [问题] EMSA做不出supershift
时间Tue Apr 17 21:34:24 2007
※ 引述《aggaci (reject！又reject！)》之铭言：
: ※ 引述《lysa (上台北了)》之铭言：
: : 请问EMSA做不出supershift会是什麽问题ㄋ??
: : antibody已经用IP证明可以跟protein binding
: : 改变cold probe浓度以及mutant probe都可以看到band的改变
: : 不晓得问题出在哪边???
: 先确定你的AB可以作EMSA
: ~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
我买的Ab是sc-186x,所以应该是可以做EMSA的
positive control
: 用CREB铁定会binding的probe作EMSA，再测试Ab能否supershift成功
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
这我不太懂,要怎麽确定这probe是creb一定可以binding的?不是要用Ab check吗?
: 看PAPER用这只抗体都是用什麽条件？
: 先加抗体？後加抗体？跟probe一起加？放冰上吗？
paper看过了...所有的情况都有试过.....包括前加後加抗体,室温下或冰上等
我想再请问板上的EMSA达人,在binding的过程中
有没有先加cold probe会有差别吗?
我都是cold probe跟hot probe同时加的...
还有请问有专门写EMSA的专书吗???
因为我不是读分生本科系出来的
很多都很不懂。。。麻烦请大家解答罗！！谢谢！！
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