作者wkj1020 (Aj)
看板Biotech
标题[求救] 纯化蛋白
时间Fri Apr 13 20:23:13 2007
我将GST fusion的蛋白用GST column纯化後(粗估2mg以上)
用amicon浓缩 再去过anion exchange column
结果发现蛋白在flow through就掉下来了
我查了sequence的pI 是6.8多
而我的buffer pH 是7.4
(Tris-HCl 20mM, NP-40 0.1% and Tris-HCl 20mM, NaCl 1M, NP-40 0.1%
两种buffer 去拉梯度过DEAE column)
理论上我的蛋白应该会bind上去可是不知为何没有上....-__-#
anyway为了救回蛋白我只好将flow through的solvent大约120ml
(里面应该只有洗column + 平衡column的溶液Tris 20mM 跟 NP-40 0.1%)
再用amicon浓缩(浩大的工程阿)
但是浓缩完了以後(~600ul)我发现浓下来的东西怪怪的
有点像aggregate 的样子 又有点像是胶状物
拿它去跑SDS-PAGE又更怪了
(有拿没过column前的去做比较, 没过的正常singel band带一点杂band)
跑的band完全糊掉 但是没有拖band, 形状像是锯齿状(marker 正常)
CCB stain的颜色也怪怪的(青色!? 不会形容) destain 一阵子就掉了
不知板上哪位大德知道我浓缩的蛋白出了什麽事 还有没有得救!!!?
不然不知道要怎麽跟PI交代罗...........
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