※ 引述《amnesiachick (;l;l)》之铭言： : 有几个跟Cy5有关的问题 希望知道的人能够给点指点^^ : Red laser light that produces fluorescent emission from Cy5 can also : switch the dye to a stable dark state. Exposure to green laser light : converts Cy5 back to the fluorescent state, but the recovery rate : depends critically on the close proximity of a secondary dye, Cy3. : 主要是有关这一段的问题.在看到这篇paper以前我认知中的Cy5是照红光就会亮, : 然後就一直亮到它photobleach为止.所以我看不懂为什麽red laser会 : "switch the dye to a stable dark state".而且这里green laser的存在目的是什麽呢? : 如果不照green laser, 一直照red laser, Cy5就不会再亮了吗? : "green laser light converts Cy5 back to the fluorescent state", : fluorescent state不是指excited state吗?可是在paper里面照绿光的 : 时候是没有emission的. 这几部分我真的很疑惑. : 另外请问Cy3跟Cy5之间的距离会影响recovery state的问题,这应该从哪个角度去解释呢? : 因为我查相关资料,里面也只是提到这个现象,但并没有详细解释为什麽? : 拜托大家了^^ 我想实验应该是利用FRET原理 Cy3的emission wavelength 有某部分与Cy5的 excitation wavelength 重叠 当以550 nm激发Cy3，只要Cy5分子靠的够近，Cy3 emission出来的能量emission wavelength就会成为Cy5的excitation wavelength(因为有重叠到)因而使Cy5释放出 萤光出来。A萤光分子的emission波长恰好落於B萤光分子的excitation波长导致A萤光 quench, B分子发光 简单说 若cy3, cy5 两分子靠的够近，激发cy3分子发光，看不到cy3发出的萤光，反而看到cy5 的萤光产生 若cy3, cy5 两分子靠的不够近，激发cy3分子发光，就只能看见cy3分子发萤光罗 -- 织田信长：「杜鹃不叫，我杀了牠！」 丰臣秀吉：「杜鹃不叫，我想办法让牠叫！」 德川家康：「杜鹃不叫，我等牠叫！」 Angus Tzeng：「杜鹃不叫，我自己叫！XD」 --

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