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标 题Re: [问题] PCR, Tm值差很多的primer
发信站新绿园 (Thu Apr 12 08:11:00 2007)
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※ 引述《[email protected] (Threatening)》之铭言：
> ───────────────────────────────────────
> 手上有一组primer
> annealing temperature最佳是60度啦
> 不过有试过到40度也可以做的出来
> 我想要拿其中的Forward或是Reverse primer来跟oligo d(T)配成一对进行PCR
> 但是Oligo d(T)的温度似乎很低 25度?
> 不知道这样两个primer之间的Tm值相差这麽多
> PCR要怎麽去调整
> ps有做过gradient PCR, 大概从35~45度, 不过没有product
> 还是就直接把Tm降到25度配合oligo d(T)勒？
请问你的oligo dT是几mer的呢?
我也有利用15 mer 的oligo dT加一个forward pirmer,用Tm = 45度跑~~
跑出来的比37度还好!!
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