※ 引述《[email protected] (我是废渣)》之铭言： : 这边我是用NanoDrop去测的 : 也是分光光度计的一种 : 测出来的值就是怎麽高 : 所以我很怀疑他是假的 : 对了 我只用了0.5ul的酵素去切 : 跑胶 只出现一条band : 此部分嘛 : 因为本实验室的人都怀疑纯化效果不好 : 你也看到了 我拿了果此多的dna量去做 : 所以依column的建议50ul的效果最好 : 所以我用两管 共是100ul : 最後transformation前来个大浓缩 : 很明显 是打错了 : 是5ng/ul : 我的估计指的是跑胶估计 : 後来有去测分光光度计上面那台 : 浓度是3ng/ul : 所以效率明显不好 : 真怪 如果你认为一开始的DNA浓度就有错误 那也不能从最後的结果就认为效率不好 假设一开始有180ug的DNA 绝对不可能以0.5ul的enzyme切好 我自己切20ug 20U/ul的限制酵素就要加到4ul 才能切完全 因为限制酵素会随着时间及存放状态(甚至一直放-20也一样)而下降 就算是刚买来的 我也不会真的以1ug DNA对1U的酵素去切 谁知道这批酵素是多久以前做好的 在运送的过程有没有缺失 所以建议你还是把一开始的DNA浓度真实测量清楚 再来谈回收率 如果你觉得那台机器测出来的值不可靠 那就换一台测 甚至只采跑胶定量的浓度去相信(我的DNA量都只靠这个测 到目前也没有出过问题) 另外 做ligation的片段在精不在多 只要DNA够正确够纯 vector+insert只要50ng(个人习惯是30ng) 就可以成功ligate --

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