※ 引述《[email protected] (蓄势待发)》之铭言： > ─────────────────────────────────────── > 我觉得你的做法好像怪怪的 > : f大大 > : 可否请教一下您家都用什麽方式纯化吗 > : 因为我们家 都乱用 大家都觉得纯化效率很差 > : 目前我取60ul(3000ng/ul)的dna去切 (我强烈怀疑这个质是假的 > 这个DNA的量真的很多耶...总共有180ug呀... > 那麽你是使用多少酵素去切呢 > 如果是NEB的EcoRI的话1ul是20U(印象中) > 那麽需使用9ul的酵素??? 这边我是用NanoDrop去测的 也是分光光度计的一种 测出来的值就是怎麽高 所以我很怀疑他是假的 对了 我只用了0.5ul的酵素去切 跑胶 只出现一条band > : 但最後胶纯化後体积100ul > 通常胶体纯化不会溶於这麽多水阿 > 为了让DNA的浓度提高 > 大概只会用30ul的水 此部分嘛 因为本实验室的人都怀疑纯化效果不好 你也看到了 我拿了果此多的dna量去做 所以依column的建议50ul的效果最好 所以我用两管 共是100ul 最後transformation前来个大浓缩 > : 浓度我估计只有5ug/ul 也就是我切了如此大量的dna却只回收到500ng左右 > DNA有两种定量方式 > 跑胶或是测OD > 为什麽要自己估计阿 > 可以回收5ug/ul...这个量真的不是普通的高耶... > 而且5ug/ul体积100ul那麽总共是500ug的DNA阿...不是500ng 很明显 是打错了 是5ng/ul 我的估计指的是跑胶估计 後来有去测分光光度计上面那台 浓度是3ng/ul > 还有原本只有180ugDNA,为什麽纯化後有500ug的DNA啊 > 你是不是写错了??? > : 所以想请教一下f大 用了多少dna去切 用什麽方式纯化 > 如果是用column纯化的话 > 有最大量的限制 > 大概是40ug左右(厂牌不同会有所差异) 所以效率明显不好 真怪 -- 如果美丽必须成为过去 别忘了临走时 请将记忆装入行囊 顺便关上曾经为你而开的窗 -- ╭─ Origin ─╗ 新绿园 bbs.sa.ncyu.edu.tw ～ κλμ ─┤ ├ Author ╡ 098063.CAGR.ncyu.edu.tw