作者pwl (蓄势待发)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问ligation的一些问题
时间Tue Apr 10 00:35:11 2007
我觉得你的做法好像怪怪的
: f大大
: 可否请教一下您家都用什麽方式纯化吗
: 因为我们家 都乱用 大家都觉得纯化效率很差
: 目前我取60ul(3000ng/ul)的dna去切 (我强烈怀疑这个质是假的
这个DNA的量真的很多耶...总共有180ug呀...
那麽你是使用多少酵素去切呢
如果是NEB的EcoRI的话1ul是20U(印象中)
那麽需使用9ul的酵素???
: 但最後胶纯化後体积100ul
通常胶体纯化不会溶於这麽多水阿
为了让DNA的浓度提高
大概只会用30ul的水
: 浓度我估计只有5ug/ul 也就是我切了如此大量的dna却只回收到500ng左右
DNA有两种定量方式
跑胶或是测OD
为什麽要自己估计阿
可以回收5ug/ul...这个量真的不是普通的高耶...
而且5ug/ul体积100ul那麽总共是500ug的DNA阿...不是500ng
还有原本只有180ugDNA,为什麽纯化後有500ug的DNA啊
你是不是写错了???
: 所以想请教一下f大 用了多少dna去切 用什麽方式纯化
如果是用column纯化的话
有最大量的限制
大概是40ug左右(厂牌不同会有所差异)
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