※ 引述《pan7353 (要变成自己喜欢的模样)》之铭言： : 我想请问一下没有 transform 的 E.coli 哪来的阿 它不会长在 LBA 上 所以用 LB 养吗? : 这个步骤是为了确认是不是 P 到 chromosome 吗? 随便放一点点（记得，真的要"一点点"!）transformation 用的 competent cell solution 在没有抗生素的agar plate 上就能得到一堆 : 4.我最後一次定序 就是用两端 M13 做 colony PCR 结果一样非常诡异 : 有 p 到两种片段 一种是预计大小的(快1000bp) 但是非常非常淡 : 另一种很粗很亮 但是不是预计大小的片段 比较小一点(600bp) : 比我的insert(850bp)还小 但是又不到没有 insert 那麽小 (200bp) : 我把有 p 到 1000bp 的送定序 恩 还是空的 : 然後我把用M13 P到两种不同片段的菌再用 insert 的 primer p一次 : 然後通通都有 850bp 的片段 这个描述听起来就是colony 同时有两种plasmid 的情况 （在假设那个1 kb 是正确product 而非non-specific product 的前提下） 只是我第一次听到这种正常size 的clone 也能有这种现象 而且size相差这麽小，没理由amplify 之後那个大的（也就是正确的）pladmid 就完全消失无踪 （....好吧，我承认我觉得那只是non-specific product） 你的vector only 这麽容易出现 倒不如留意看看enzyme digestion 和 de-phosphorylation 过程有没有做好 PCR 是个很sensitive 的反应，有时候一些杂讯也不要太钻牛角尖了 -- 年 轻 的 旅 人 之 歌： 真诚的心，洞悉一切隐藏的美 执着的心，在暗地里苦苦思索 勇敢的心，无畏无惧 --

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