不好意思 这个问题我其实已经问过一次了 但是还是没有解决 我的 insert DNA 有 846bp(PCR 得到的) 放到 yT&A 的 TA cloning vector 中(用 TA clone 接) 蓝白筛选了六个 colony 做 PCR 结果都有 specific 的片段(用insert DNA的primer P) 挑了四个 colony 送定序後 结果四个都没有 insert DNA 的序列 (用 vector 上的 M13 定序) 甚至连当初做 colony PCR 的 primer 序列都没有 我已经试过的方法 1.换 pGEMT system 其他一样 无效(因为我怀疑 colony PCR P 到 vector 上其他序列) 2.定序结果我有试过互补和反转的序列了 都一样 定序结果只有 vector 序列 3.直接抽 plasmid 用RE切 结果显示没有插入任何片段 4.把当初 PCR 得到的 insert 片段直接送定序 结果是正确的序列 5.另外 我们实验室有三个人做 cloning 都发生一样的情况 就是 colony PCR 有 band 但定序回来都只剩下 vector 序列 抱歉 问题有点长 其实我的重点就是 为何colony PCR 可 P 到 定序却无结果? 那麽 colony PCR 究竟 P 到了什麽东西勒? --

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