作者ad1980 (Apoptosis)
看板Biotech
标题[问题] RNAi knock down
时间Fri Mar 30 11:15:02 2007
不好意思，又是我，本来要跟上面那篇一起的，
可是问题好像不太一样，所以开新的一篇。
还有一个问题想请教大家，
现在在做 knock-down, 用 pSuper，
想请问一下，要多久才能看到knock down 阿？
24 hrs 会太短嘛？我看papers 都是3-5 days,
但是我想问说通常transfection後，大概多久之後会开始knock-down。
还有，我现在做是用immunostaining，然後再用ImageJ量signal intensity，
看看有没有减少，不过这样感觉好像少了什麽。
除了Western blot之外还有其它方法知道到底有没有成功knock-down 嘛？
因为我做RNAi主要是想确定我的Ab 是对的，是specific to my protein，
如果intensity 有减少代表Ab没错，问题是Ab要很concentrate才能在WB显现，
做WB的话会用掉很多很多Ab....
不知道大家通常是怎麽确定有没有knock down 成功。
感谢。
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梦想和现实是有距离的。
一切都将重新开始....
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◆ From: 64.180.57.97
1F：推 mandible:用RT-PCR先抓时间点.你说有其他方法看RNAi我不太懂你的意 03/30 13:37
2F：→ mandible:思..通常paper要protein knock down达70%才说有效果 03/30 13:38
3F：→ ad1980:我不是说有其他方法啦！只是想看看有没有其他方法。 04/01 10:25
4F：→ ad1980:我的pSuper construct 是人家给的，他们已经先用RT-PCR 04/01 10:26
5F：→ ad1980:测过了，我们拿来想试在细胞里，看有没有抑制蛋白质表现。 04/01 10:27
6F：→ ad1980:要70%喔... 恩，看来我还要继续努力试... 04/01 10:28