作者robertkoch (为什麽要昵称)
看板Biotech
标题Re: [问题] 请问IP的抗体
时间Tue Mar 27 01:24:44 2007
※ 引述《mikis1107 (mikis1107)》之铭言：
: 请问IP实验中
: 先用Rabbit的抗体将目标蛋白质抓下来後
: 想要看他的磷酸化反应
: 那此时用的WB anti-phophoXX的抗体
: 是不是要用非rabbit的抗体呢?
: 还是两种一样是rabbit也可以呢?
要用不一样比较好
因为加二抗时认的是一抗的 Fc
如果连 IP 也有一样的 Fc
那会有辨认错误的状况发生
结果会变成有磷酸化和无磷酸化讯号差别不大
(Fc:Antibody 的尾端)
另一种状况是有跑 SDS-PAGE
此时的 IP 用的 Antibody 的 heavy chain (就是有 Fc 的那一端)
会大约在 50kD 左右的位子
所以你的目标蛋白质不在这个范围就可以用同样的
为什麽呢
因为当你用二抗时 50kD 这个位子也会被辨认到(IP 和 WB 1抗 同为 Rabbit 时)
如果你的目标蛋白质刚好在这附近
就会被他"强大"的讯号遮蔽
我表达的不是很好
希望你看的懂
P.S. 我们实验室也用过一样的 结果我们的目标蛋白质也在 50kD 附近
就发现了这个问题
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※ 编辑: robertkoch 来自: 134.208.24.109 (03/27 14:43)