作者linker0726 (哀..烦阿)
看板Biotech
标题Re: [问题] 数细胞的方法??
时间Sun Mar 25 13:04:56 2007
※ 引述《LIAR (堕天使)》之铭言:
: ※ 引述《boyo (29大头)》之铭言:
: : 你学长不对 只数中间那块会有不少误差
: : 这个protocol写的才是对的
: : 要数这四大块的原因 是因为你在load cell suspension到counter时
: : 靠近tip的那边 一定会比较多细胞 另一边一定会比较少
: : 所以要数这四块再平均 当然九块都数是最准
: : 要紧急数细胞时 比方离心完要立即处理
: : 可以数左上 左下 或是右上 右下
: 我觉得还要考虑原本细胞的多寡,数量少的容易有随机误差,要多数一些。
: 所以WBC和RBC在计算时就会算不一样的格子。
: 另外就是loading的量,我一般会loading到30ul,主要是让medium冲过头,避免boyo
: 说的情况,通常我会建议要把整个面盖满,最好再流一些到沟槽中。
: 当然沟槽一定要乾净啦,而且两边最好不要同时算不一样的。
恩..我说说我的方法 请问大家这样对不对
我要将细胞种到24well内 1well先加1cc medium
将细胞打下来
离心
离完後倒掉上清液 加入6cc medium
冲散细胞 抽出100ul + trypan blue 400ul 数细胞
数最左上 左下 右下 右上的细胞平均数
计算: 数的细胞*6*10^4/ml=总共细胞数
我要种4*10^4/well
所以每well要放入: 总共细胞数/6000=4*10^4/X X=要从6cc内取的量(ul)
请问这样对吗??
谢谢
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◆ From: 125.226.81.12
1F:推 runpapa0520:你少乘了染色时的稀释倍数,另外dye用量是1:1吧。 03/25 13:24
2F:推 linker0726:1:1 ? 是指抽出的细胞:trypan blue? 03/25 13:43
3F:推 runpapa0520:是的,如果细胞浓的话可以取PBS稀释但跟DYE比例还是1:1 03/25 16:26
4F:推 linker0726:恩...因为这也是学长交我的..我其实不知道@@ 03/25 17:07