※ 引述《JeffreyS (念)》之铭言： : ※ 引述《Mouseking (叫我老鼠王....-_-)》之铭言： : : 请教各位先进 : : 如果我把EGFP放进BL21 : : IPTG induction後 : : 可以纯化出一管会发萤光的蛋白质吗？ : : 一时好奇......有人试过吗？谢谢？ : (个人没有试过 不过 觉得这是一个很有趣的问题 可以当成思考练习:p) : 可以先试想 : eGFP是怎样的一个蛋白: : 他与原始自然界水母的GFP有什麽不一样呢? : 分子量非常大吗? : 具有复杂的修饰 或是需要别的蛋白来帮它摺叠成正确的形状吗? : 还是 需要经过别的酵素加工切成成熟的模样呢? : 如果查不到资料呢 那换个角度想好了 : eGFP可以做什麽研究? : 很常见的用法之一 便是把他接在我们要看的蛋白上 : 可以不用经过繁琐的免疫萤光染色法 只要直接把表现细胞拿到萤光显微镜下一看 : 有绿没绿 有没有表现 一看就知道 : 还可以用Sorting的技术 来把表现量高的细胞挑出来 或是用Flow来定量 : 这是做蛋白质功能性研究很方便的一个工具 : (就像是在满满的不好笑joke海里 可以轻松的靠m标记 来找出真正的笑点) : 所以 eGFP不应该是一个很难做又很大的蛋白 : 不然 被我们强迫接上的目标蛋白 不就变成像是拖了铅球的囚犯 无法发会正常的功能了!! : 罗哩罗唆嘴炮了这麽多 : 其实 eGFP能不能在细菌上表现 我们应该可以得到一个可靠的假设了 : 接下来 就是实验验证啦 我记得GFP这种东西己经有人做过了吧..而且还是常被拿来实验的工具 f^^" 之前有看一篇paper..就是用这种蛋白来做实验的 是用一种synthetic gene的观念,好像是麻省理工作的实验 把基因设计成类似 [promotor]-[GFP]-[repressor] 这样 当promotor被启动时,GFP就会产生,细菌发光,但同时产生repressor去抑制promotor 当promotor被抑制时,GFP不会产生,细菌不发光,但也不产生repressor 这样一直cycle下去,细菌就会一闪一闪的像圣诞树啦 ^^ 不过由於repressor的堆积,所以目前只有前面有效果 --

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