作者kayle (kay)
看板Biotech
标题[问题] total protein extraction问题
时间Tue Mar 13 18:43:28 2007
关於mammalian cell total protein extraction的问题
因为lab设备问题,无法用物理方式破细胞
我在网路上找了几个buffer
目前用的是类似RIPA的配方
含Tris, NaCl,EDTA, 0.2% Triton, 0.1% SDS, 1mM PMSF
10的6次方细胞加入50ul
再把细胞lysis後,12000rpm,离心 30 min之後
有个取上清液的步骤
我可以很清楚的看到细胞被lysis, solution成透明
可是整个solution呈现很黏稠的的情况(DNA造成的吗?)
几乎没办法取"上清"
除了增加reagent用量外
该怎麽处理这个情况??
请有经验的大大帮忙一下,感谢!!
另外一个笨问题
SDS是很强的介面活性剂吧
那他到底会不会把protein denature掉??
那如果後续要做蛋白质纯化 (protein要有function)
是不是就不应该用SDS??
那又该用什麽reagent来lysis细胞呢???
感谢!!!
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◆ From: 59.121.118.133
1F：推 aswen:加一些DNAse reverse mix几秒 然後再去离心就可以了 03/13 19:16
2F：推 LIAR:请问reverse mix是什麽？ 03/14 00:42
3F：推 stemcell:1% NP-40好用 不需要SDS 03/17 00:36