作者jaycao (风一吹特别冷)
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标题Re: [问题] 请问PCR...
时间Wed Apr 26 00:52:12 2006
※ 引述《myy720 (永远的画面)》之铭言：
: 1.是否可以说明对照模板(control template)如何检测PCR反应条件是否成立,
: 即反应确实可进行?
: 我记得PCR反应条件为:?94℃作用1分钟?55℃作用1分钟?72℃作用1分钟,
: 同条件反覆作35次?72℃作用10分钟。总反应时间约2.5小时
: 请问要如何检测呢?
阳性control拉得出条带就说明反应体系和条件没问题，没拉出就肯定哪有问题了
阴性control拉出条带，就说明你的反应体系被污染了
另
进入循环之前要先94度预变性数分钟
其余反应条件也应该随模板和引物的不同而不同，尤其退火温度和延伸时间
: 2.TaKaRaExTaq?是否可由其他DNA合成酵素如DNA polymerase Ⅲ取代?
可以用KOD pfu等DNA polymerase代替，看需要了，基本上各有各的好处
polymeraseIII好像没有人拿来做PCR吧，没听说过
但要讲为什麽不可以
我就不知道了
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 202.127.20.26
1F：→ jaycao:internal control是用来比较不同样品之间加样量是否一样 04/26 00:53
2F：推 starcindy:一般的DNA polymeraseIII不耐高温，不能用在PCR吧! 04/26 02:13
3F：→ starcindy:Pfu和常使用的Taq不一样是他是3'->5'exonuclease 04/26 02:15
4F：→ starcindy:Taq做出来的product都会再加上polyA tail, Puf 则否 04/26 02:16
5F：→ starcindy:每一种polymerase在95度C的半衰期也不同 04/26 02:17
6F：→ jaycao:pfu与Taq主要区别是扩增能力和保真度，加不加A，除非你连T 04/26 23:22
7F：→ jaycao:vector，否则没关系的 04/26 23:23