作者ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)
看板Biotech
标题Re: [问题]GST fusion protein的问题
时间Fri Apr 21 14:40:47 2006
※ 引述《churchfire (别小看我...)》之铭言：
: 我在做GST-fusion protein的时候
: 我一开始养小量的试IPTG&温度&时间
: 後来我在试时间的时候，IPGT浓度固定在0.4mM 温度25度
: 0、3、6、9小时都收，在跑PAGE的时候其实看不怎麽出来我的蛋白有没有大量表现
: 我的蛋白(26KD)加上GST(26KD)大约为52KD
: 反观GST在26KD的位置都有表现!
: 同样的条件去做western
: 只有3hr的菌有看到微弱fusion protein的band 并有明显的GST only的band
你上面的状况我最近也遇到了
我的chimera protein (GST-XXX) 大约是 42 kD
(用BL21(DE3)当表现的host cell)
跑出来除了差不多size的地方有明显的粗band外
在28kD附近也有很粗大一条
但，当我把相同的clone送到JM109以後这情形就消失了
这情况我同学也发生
我们俩觉得是不是因为那个被peptidase辨识的区域的a.a.链比较弱
所以容易断掉....
(以上纯为推测)
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