※ 引述《linzhengzhan (研究所：硕士班vs博士班)》之铭言： : ※ 引述《ppqu4 (屁啦)》之铭言： : : 请问DNA在用酒精浓缩後 : : 有些protocal说可用TE buffer 溶解 : TE buffer 利於长期何保存DNA (因为tris为good buffer，EDTA为metal的螯合剂) : 可避免pH值的剧烈变化，亦可保护DNA不受DNase破坏。 : : 也有的说可以用二次水 (有的说室温也有的说4度C) : ddH2O可用於短期的回溶；如果想溶的又好又快，可以用ddH2O，但不利於长期保存。 : 回溶的温度 (我的经验) : →in Room Temperture，30min~overnight →store in 4℃ : →in 37℃，1~1.5hr →操作实验 : →in 4℃，没试过；我用4℃是用於保存DNA的 : : 不晓得这三者有何差别? : : 而且有的还会建议说 : : 用TE buffer溶的可以37度C加热数分钟帮助溶解 : : 用二次水溶的可用56度C帮助溶解 : 只要DNA不denatur的话，高於常温，应该是可以接受的 (重点是不要破坏DNA) : 温度的高低，只是回溶的效果与时间上的关系，只要时间够，自然就能够回溶完全。 : : 请问为何会有温度上的差别呢?? : : 想知道原因是什麽? : : 恳请解惑 XD : : 谢谢 谢谢你的回答~ 我查到书上的说明的确也是像你说的用TEbuffer加热37℃助溶 不过问过实验室的人几乎全都是用ddH2O回溶然後直接冰4℃ 甚至-20℃ 却没听他们说有发生不良的情况 所以才觉得很好奇... 而且学长说加热56℃帮助回溶的原因 与最一开始加buffer到组织中加热56℃的理由一样 不过我不懂的地方是 如果是要使proteinase K反应的话 37℃就够了 为何需要加热到56℃(许多实验室甚至加热到65℃) 是为了破菌或是抑制DNase的反应吗? 我听说有些人在使用primer之前也会先加热到56℃ 不晓得是否也是同样的道理? 另外 不晓得大家是否有发生过酒精倒掉後倒扣overnight却还不乾的情况 我查过书也问过其他实验室的做法 有的是直接用speedvac 有的直接拿去加热蒸乾 还有的是再离心一次直接用pipet把剩下的水吸出来 而书上是建议用毛细吸管不然就是用真空乾燥器或冷冻乾燥器 不过书上有特别说明即使离心过DNA还是不会紧附在离心管壁上 所以直接用pipet吸剩下水的方式是不是很不保险阿 (尤其状况很差的情况下) XD 但如果没有speedvac也没有毛细吸管的话该怎麽办... 虽然有人是说摆了两三天还是不乾就直接加水回溶保存算了 恩..以上是一些蛮细节的小问题啦 每种方法都有人做..而做的人也都说好像没差 但我还是想了解这之中是否会有些原理上的差别 我查过的书是molecular cloning -a laboratory manual 还有 gene cloning and DNA analysis- an introduction 都没看到关於这些细部的解释 至於圣经molecular clone也是找不到 是否可以指点一下哪里可以查到这些方法步骤的原理说明呢? 谢谢罗~ -- --

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