※ 引述《aggaci (有气质的台客)》之铭言： : ※ 引述《ROKEE (可不可以不要再胖下去啦~)》之铭言： : : ^^^^ 真贴切的形容词 >< : : 我觉得你要不要把整个silver stain protocal放上来让大夥看看? : : 至少我身边3间实验室各自的银染手法都不太一样 : : 这没关系，我的染盆是多用途的咧，染Commassie blue、做western、银染 : : 都用同一个 XDDDD : : 我自己的撇步啦，formaldyhyde多放一点，大概多个15~20%吧 : : 这样呈色速度快一点的话或许可以避免你上述的「昆布效应」 :p : 真的吗?? : 没什麽副作用吗? : : 我猜是因为在AgNO3後的水喜步骤不够乾净 : : 所以有残留的银在PAGE上，导致Na2CO3呈色时Ag的颜色就跑出来了 : 欧 可是我在加硝酸银的那一步就有黄色的background了呢 : 我看别人都不会阿~ : 我的步骤是 : 1. 50 ml actetic acid + 200 ml methanol + ddH2O 250 ml 2hr : 2. 160 ml methanol + 1.6g sodium thiosulfate + 34 g sodium acetate 30min : 3. 500 ml ddH2O 5 min*3 : 4. 1.25 g silver nitrate/500 ml ddH2O 20min : 5. 500 ml H2O wash 1min*2 : 6. 12.5g sodium carbonate + 200 ul formadehyde/500 ml ddH2O 4min~10min : 7. 6g EDTA 10min : 8. 500 ml ddH2O : 奇怪 : 我有看到在第4步有人会加formadehyde的 : 降子银不会被提早还原吗??? : 对了!谢谢您的回覆噜 我的步骤： 1. 将SDS-PAGE胶片浸泡於含12% acetate和50% ethanol之fix solution内至少2小时 至隔夜。 2. 倒掉fix solution以50% ethanol清洗浸泡20分钟，重复此步骤3次。 3. 将胶体放置於含0.02% 之Na2S2O3内浸泡1分钟。 4. 再以去离子水反覆冲洗胶体3次，每次20秒。 5. 之後将胶体置於硝酸银溶夜中作用20~60分钟。 (硝酸银溶液:1g AgNO3 + 37ul 37% formaldyde, total 50ml) 6. 倒掉硝酸银溶夜後，将胶片以去离子水反覆冲洗3次，每次30秒。 7. 然後将胶体置於developing solution 中，轻摇至蛋白质条带呈色。 (developing soln:30g NaCO3 + 25ul 37% formaldedyde + 20ul 20%Na2S2O3, total 50ml) *通常我会放30ul 37% formaldyhyde* 8. 待呈色完毕後将胶体置於3.5% acetate中40分钟以终止呈色反应。 9. 然後将胶体置於去离子水中轻摇以除去多於acetate。 10. 最後将胶体置於保存液中(5% glycerol和20% methanol)或以玻璃纸封片後风乾保存。 -- 大概就这样吧 :p --

※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.213.101