作者ghjkl (黄宝臻黄宝臻黄宝臻)
看板Biotech
标题Re: [问题]不同的细胞固定方法
时间Sat Apr 15 01:26:35 2006
※ 引述《fjubiology (Proposal结束)》之铭言：
: ※ 引述《[email protected] (六百)》之铭言：
: : 想问 PFA 跟 有机溶剂固定之间的差异
: : 我的认知是有机溶剂比较适合 cytoskeleton 的固定
: : 有些细胞质内的蛋白质则可能会扩散或流失掉
: : PFA 的固定则似乎没有那麽"牢" 经验上总绝得细胞比较容易浮起来
: : 想请问 如果是单纯要看 GFP / EGFP, 是否可以用有机溶剂来固定呢？
: : 又，如果是带 GFP 的 fusion protein,
: : 是否有什麽法则预先判断是否适合使用有机溶剂固定？
: 以我以前作粒线体蛋白萤光染色，建议用3.7 %的PFA pH 7.，通常我都是用medium固定。
: PFA加热後会偏硷，所以通常我都把STOCK的PFA调成 pH 3~4左右，跟MEDIUM混完後
: pH大概是7左右，刚刚好不会使细胞/粒线体变形。固定时间约为15～30分，室温。
我是配在PBS里面
PFA 3% 加到PBS里面之後放到55度水浴槽中
等到PFA溶解後再调pH值
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大家都说没有相本的是逊咖
好险我刚好有
http://photo.youthwant.com.tw/GHJKL1478
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※ 发信站: 批踢踢实业坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.131.67
1F：推 farmland:请问PFA在PBS中 水浴55度需要花很久时间吗? 04/15 21:53
2F：推 fjubiology:不会，大约是2到5分钟 04/15 23:02